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Categoría: Soja
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 Casete de Germinación y Sanidad de Semillas: Su
uso en la Evaluación de la Calidad de Semillas de Soja
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Palabras clave: soja, análisis, recipiente
de germinación
 Introducción
En el proceso de control de calidad de lotes de
semillas se utilizan en el mundo una serie de pruebas o análisis
para determinar el valor de la semilla para siembra. La Prueba de
Germinación Estándar es la técnica que se utiliza
internacionalmente y dentro de un mismo país para determinar la
calidad comercial de los lotes. Para la ejecución de estos
análisis se utilizan distintos tipos de recipientes que contienen
en su interior sustratos como arena, papel, tierra, compost, etc.,
en cantidad suficiente y con la humedad adecuada para sostener el
crecimiento de las plántulas. La conducción de estos ensayos
presenta ciertas desventajas: 1) consumen gran espacio físico
dentro del ambiente de germinación, 2) no quedan registros visuales
de los resultados de las pruebas y 3) no se dispone de un archivo
probatorio complementario de la calidad expresada en el certificado
de análisis (Craviotto et al, 2006). En el Laboratorio de Semillas
de la EEA Oliveros del INTA, se desarrolló una nueva herramienta
para ser utilizada en el Control de Calidad de Semillas. Se trata de
un nuevo recipiente denominado Casete de Germinación y Sanidad
Semillas (patente Nº 040101501). El objetivo del trabajo
fue evaluar la aptitud del nuevo recipiente de germinación aplicado
al diagnóstico de calidad de semilla de soja que conjuga las
ventajas de los métodos tradicionales con las nuevas herramientas
relacionadas con imágenes digitales y su manipulación
informática.
Materiales y Métodos
Los ensayos se condujeron en el Laboratorio de
la EEA Oliveros del INTA, Santa Fe Argentina. Se utilizó semilla
comercial de soja del cv Don Mario 4870, que se sembró en el casete
de germinación (INTA – Rizobacter) y se utilizaron 4 repeticiones
de 50 semillas. Para la evaluación de la calidad de las semillas se
utilizó la metodología de la Prueba de Germinación Estándar.
El casete de germinación de semillas es un
recipiente rectangular de 30 mm de espesor X 245mm de ancho y 310mm
de largo, con doble compartimiento (bastidor central). Posee tapas
transparentes de superficies escaneables (210 x 297 mm.) que al
cerrarse generan cajas de siembra independientes donde se coloca el
sustrato (Fig.1). El casete dispone de suplementos para conducir los
ensayos de germinación y de sanidad de semillas.
Las semillas quedan retenidas entre la tapa
transparente y el sustrato de manera que durante el transcurso del
ensayo se puede observar el crecimiento de las plántulas. Cada tapa
posee cuatro nervios internos, equidistantes y paralelos al largo
mayor del casete que generan cuatro líneas de siembra. Por debajo
de la última línea de siembra, cada tapa presenta un dispositivo
antigoteo que deriva el agua de escurrimiento hacia un receptáculo
colector.
El casete posee suplementos específicos para la
Prueba de Germinación, de 4 y 6 mm de altura, que permiten reducir
el espacio destinado al sustrato dentro del casete, para su uso en
semillas de diferentes tamaños. Los suplementos consisten en una
estructura rectangular de sección plana y en su superficie poseen
un fino rayado de líneas paralelas para frenar la velocidad de
escurrimiento vertical del agua.
Siembra en sustrato arena
En cada caja de siembra del casete se colocaron
5 mm de arena húmeda, previamente tamizada y esterilizada. La arena
se compactó para lograr una superficie de siembra uniforme. Sobre
la arena se colocó un papel de germinación seco (Schleicher &
Schuell, Unisfera (LTD), Argentina) de 65 gr/m², cortado
previamente al tamaño adecuado, 305mm X 230mm, introduciendo la
parte inferior de éste en el receptáculo colector de agua del
casete. El papel de germinación se roció con agua hasta que toda
la superficie estuvo uniformemente húmeda y saturada (100 % de su
capacidad de retención de agua). Se marcaron las líneas de siembra
cerrando la tapa y presionando ligeramente sobre el sustrato así
preparado. Luego se colocaron las semillas sobre las líneas
marcadas en el papel. Se distribuyeron las 50 semillas por cara del
casete colocando 12 semillas en las dos líneas superiores y 13
semillas en las líneas inferiores (Fig. 2). Se dio vuelta el casete
y se procedió igual a la otra cara.
Se cerró el casete y se colocó en posición
vertical dentro del ambiente de germinación a 25ºC de manera que
las plántulas al germinar pudiesen expresar su patrón natural de
crecimiento. Para evitar pérdidas de humedad del sistema se
introdujo el casete dentro de una bolsa de polietileno.
Siembra en sustrato papel
En el interior del casete se colocó un
suplemento de 4 mm de altura. Sobre este suplemento se colocaron dos
hojas de papel de germinación (Schleicher & Schuell, Unisfera
LTD. Argentina), introduciendo la parte inferior dentro del
receptáculo colector de agua del casete. Se roció el papel con
agua hasta saturación. Se realizó la siembra en cada una de las
tapas del casete sobre las líneas de siembra formadas por los
nervios internos de cada tapa. Se pulverizó la tapa con una fina
capa de agua para facilitar la adherencia de las semillas y
distribuyeron las 50 semillas sobre las 4 líneas de siembra. Luego
las semillas se cubrieron con una hoja de papel de germinación que
se humedeció con rociador hasta saturación, quedando retenidas las
semillas entre la tapa y el papel de germinación y se cerró
cuidadosamente el casete secando la otra cara. Posteriormente se
colocó en posición vertical en el ambiente de germinación a 25ºC
y dentro de una bolsa de polietileno para evitar perdidas de humedad
del sistema.
Durante el periodo de incubación en la cámara
se realizaron observaciones diarias del casete para registrar la
producción y evolución de las plántulas dentro del mismo.
Al finalizar el período de incubación en la
cámara de germinación, se retiró el casete para realizar la
evaluación de las plántulas. Se realizó el escaneo de ambas caras
del casete para generar el archivo digital del análisis (Fig.3).
Con posterioridad se realizó la evaluación de plántulas en forma
manual y/ o digital desde la pantalla de la PC.
Resultados y Conclusiones
Para ambos sustratos se obtuvo un proceso de
germinación satisfactorio poniéndose en evidencia un adecuado
comportamiento de las condiciones del ambiente de germinación
proporcionado por el casete a las semillas de soja.
Se observó una evolución normal de las
plántulas dentro del casete, en el sentido de alcanzarse el patrón
de crecimiento basado en el geotropismo positivo de raíz y parte
aérea. Al mismo tiempo se comprobó que la cámara de aire dentro
del casete, formada por el espacio existente entre la tapa y el
sustrato, (donde germinaron las semillas y evolucionaron las
plántulas) fue adecuada y no interfirió con la elongación
esperada de las estructuras de las plántulas.
Las características estructurales del casete
permitieron un seguimiento diario del proceso de germinación de las
semillas de soja durante su estadía en la cámara de germinación.
Esto posibilitó la realización de escaneos diarios a fin de
registrar el avance del proceso germinativo.
A diferencia de los recipientes tradicionales
usados en la Prueba de Germinación Estándar, se observó la
necesidad de realizar un conteo anticipado de las plántulas, y no
esperar el número de días prescriptos por las Reglas de la
Asociación Internacional de Análisis de Semillas (ISTA, 2003) para
el Conteo Final de la prueba.
El casete permitió incorporar un gran número
de ventajas tanto a los análisis de rutina como a la
investigación. Algunas de estas ventajas fueron mejoras de
importancia relacionadas con la rutina de laboratorio, y otras
representaron un gran avance en la concepción misma del análisis
de calidad de un lote de semillas. Entre las primeras se destacaron
la posibilidad de optimizar el uso del espacio en los
ambientes de germinación. En este sentido la innovación permitió
multiplicar el número de análisis por unidad de superficie,
liberando espacios y aumentando el potencial de trabajo del
laboratorio.
Por otra parte el invento agilizó el
seguimiento y/o monitoreo visual directo del análisis en el tiempo,
permitiendo al analista realizar un control más detallado del
proceso de germinación. De esta manera se incorporó al proceso de
análisis la posibilidad de realizar un pronóstico sobre la
calidad máxima a obtenerse.
La determinación del Primer Conteo se
facilitó de manera sustancial al no tener que desarmar
sustratos de germinación, sino que se pudo realizar con la
observación directa de las plántulas sin abrir el casete.
El Conteo Anticipado de plántulas se
realizó con mayor precisión mediante la observación directa
visual de todas las estructuras de las plántulas, tanto en la
evaluación manual como mediante el procesamiento de imágenes.
El casete constituye un avance en la concepción
del control de calidad de semillas ya que posibilitó obtener
imágenes digitales del análisis y archivarlo, generando una
biblioteca digital, y sugiriendo que el análisis de imágenes tiene
una gran aplicación en el análisis de calidad de semillas.
La digitalización hizo posible la evaluación
en tiempo real o diferido; el intercambio de información entre
laboratorios en tiempo real para evacuar dudas sobre la evaluación
de plántulas. El análisis de germinación pudo ser llevado
a cabo luego de la digitalización en la forma manual tradicional
extrayendo las plántulas desde el interior del casete, o
directamente desde la pantalla de la PC.
El uso del casete de semillas en la rutina del
laboratorio en forma sistemática y con la incorporación de
sistemas de identificación de muestras tales como el código de
barras conformará un verdadero proceso de trazabilidad dentro de
los laboratorios de análisis de semillas.
Fig.1 Componentes del Casete de Germinación:
Bastidor central (A), Tapa escaneable (B) y Receptáculo
colector (C).
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Fig. 2 Siembra de semillas de soja en el Casete de
Germinación.
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Fig. 3 Imagen escaneada del Casete de Germinación.
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Agradecimientos
A los auxiliares y analistas del Laboratorio de
Semillas de la EEA Oliveros que contribuyeron a la
realización del ensayo.
Bibliografía
Craviotto, R.M.; Arango Perearnau, M.R.;
Gallo, C. Casete de Análisis de Germinación y Sanidad de
Semillas. 2006 SEED NEWS. Año X Nº 1 INSS 1415-0387. Pag: 8-9
International Seed Testing Association (ISTA)
. 2003. International Rules for Seed Testing. ISBN
3-906549-38-0 P.O. BOX 308, 8303 Basserdorf, CH- Switzerland,
Suiza. Pag. 500
Autores:
C. Gallo*; R. M. Craviotto; M. R. Arango Perearnau.
INTA Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, Estación
Experimental Agropecuaria Oliveros. Ruta Nacional 11 KM 353.
Oliveros. Tel (03476)498010. cgallo@correo.inta.gov.ar*
, rcraviotto@arnet.com.ar
, marango@correo.inta.gov.ar
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